十二 15

CpG Islands记录文件下载的4种方式

这个也是读者来信最多的,关于基因组某些区域的起始终止坐标的下载问题,genomic feature的问题,一般是gtf文件或者bed文件,比如人类hg19上面的所有外显子的坐标记录文件,所有基因的坐标记录文件,所有lncRNA,rRNA等等,我这里拿CpG Islands记录文件下载的4种方式举例子给大家说明一下: Continue reading

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6种方式下载ENCODE计划的所有数据

DNA元件百科全书(Encyclopedia of DNA Elements, ENCODE)ENCODE计划的重要性我就不多说了,如果大家还不是很了解,可以直接跳到本文末尾去下载一下ENCODE教程,好好学习。该计划采用以下几种高通量测序技术来刻画了超过100种不同的细胞系或者组织内的全基因组范围内的基因调控元件信息。本来只是针对人类的,后来对mouse以及fly等模式生物也开始测这些数据并进行分析了, 叫做 modENCODE
  • chromatin structure (5C)
  • open chromatin (DNase-seq and FAIRE-seq)
  • histone modifications and DNA-binding of over 100 transcription factors (ChIP-seq)
  • RNA transcription (RNAseq and CAGE)

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用UCSC提供的Genome Browser工具来可视化customTrack

customTrack,我这里翻译为自定义的测序片段示踪文件,可以追踪我们的reads到底比对到了参加基因组的什么区域,或者追踪参考基因组的各个区域的覆盖度,测序深度!翻译自:http://genome.ucsc.edu/goldenPath/help/customTrack.html  这个非常有用!!!
UCSC提供的Genome Browser工具非常好用,可以很方便的浏览我们的测序数据在参考基因组的比对情况,由于定义好了一系列track的文件格式,用户可以非常方便的上传自己的track文件,但是如果用户超过48小时没有浏览自己的数据,UCSC会默认删除掉这些数据,除非用户已经保存在session里面。或者用户可以分享这些自定义的reads示踪文件customTrack。

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wig、bigWig和bedgraph文件详解

我们一般会熟悉sam/bam格式文件,就是把测序reads比对到参考基因组后的文件!bam或者bed格式的文件主要是为了追踪我们的reads到底比对到了参加基因组的什么区域,而UCSC规定的这几个文件格式(wig、bigWig和bedgraph)用处不一样,仅仅是为了追踪参考基因组的各个区域的覆盖度,测序深度!而且这些定义好的文件,可以无缝连接到UCSC的Genome Browser工具里面进行可视化!
这个网站提供了这几种数据格式的构造及转换脚本:http://barcwiki.wi.mit.edu/wiki/SOPs/coordinates
对SE数据,可以用macs2 pileup --extsize 200 -i $sample.bam -o $sample.bdg 把bam文件转换为bedgraph文件,不需要call peaks这一步骤。
而UCSC的ftp里面可以下载bedGraphToBigWig $sample.bdg ~/reference/genome/mm10/mm10.chrom.sizes $sample.bw 把bedgraph文件转换为bw文件,其余的转换工具都可以下载。

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基因组各种版本对应关系

我是受到了SOAPfuse的启发才想到整理各种基因组版本的对应关系,完整版!!!
以后再也不用担心各种基因组版本混乱了,我还特意把所有的下载链接都找到了,可以下载任意版本基因组的基因fasta文件,gtf注释文件等等!!!
首先是NCBI对应UCSC,对应ENSEMBL数据库:
GRCh36 (hg18): ENSEMBL release_52.
GRCh37 (hg19): ENSEMBL release_59/61/64/68/69/75.
GRCh38 (hg38): ENSEMBL  release_76/77/78/80/81/82.
可以看到ENSEMBL的版本特别复杂!!!很容易搞混!
但是UCSC的版本就简单了,就hg18,19,38, 常用的是hg19,但是我推荐大家都转为hg38
看起来NCBI也是很简单,就GRCh36,37,38,但是里面水也很深!
Feb 13 2014 00:00    Directory April_14_2003
Apr 06 2006 00:00    Directory BUILD.33
Apr 06 2006 00:00    Directory BUILD.34.1
Apr 06 2006 00:00    Directory BUILD.34.2
Apr 06 2006 00:00    Directory BUILD.34.3
Apr 06 2006 00:00    Directory BUILD.35.1
Aug 03 2009 00:00    Directory BUILD.36.1
Aug 03 2009 00:00    Directory BUILD.36.2
Sep 04 2012 00:00    Directory BUILD.36.3
Jun 30 2011 00:00    Directory BUILD.37.1
Sep 07 2011 00:00    Directory BUILD.37.2
Dec 12 2012 00:00    Directory BUILD.37.3
可以看到,有37.1,   37.2,  37.3 等等,不过这种版本一般指的是注释在更新,基因组序列一般不会更新!!!
反正你记住hg19基因组大小是3G,压缩后八九百兆即可!!!
如果要下载GTF注释文件,基因组版本尤为重要!!!
对于ensembl:
变幻中间的release就可以拿到所有版本信息:ftp://ftp.ensembl.org/pub/
对于UCSC,那就有点麻烦了:
需要选择一系列参数:
2. Select the following options:
clade: Mammal
genome: Human
assembly: Feb. 2009 (GRCh37/hg19)
group: Genes and Gene Predictions
track: UCSC Genes
table: knownGene
region: Select "genome" for the entire genome.
output format: GTF - gene transfer format
output file: enter a file name to save your results to a file, or leave blank to display results in the browser
3. Click 'get output'.
 现在重点来了,搞清楚版本关系了,就要下载呀!
UCSC里面下载非常方便,只需要根据基因组简称来拼接url即可:
或者用shell脚本指定下载的染色体号:
for i in $(seq 1 22) X Y M;
do echo $i;
wget http://hgdownload.cse.ucsc.edu/goldenPath/hg19/chromosomes/chr${i}.fa.gz;
## 这里也可以用NCBI的:ftp://ftp.ncbi.nih.gov/genomes/M_musculus/ARCHIVE/MGSCv3_Release3/Assembled_Chromosomes/chr前缀
done
gunzip *.gz
for i in $(seq 1 22) X Y M;
do cat chr${i}.fa >> hg19.fasta;
done
rm -fr chr*.fasta
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根据染色体起始终止点坐标来获取碱基序列

这次要介绍一个非常实用的工具,很多时候,我们有一个染色体编号已经染色体起始终止为止,我们想知道这段序列是什么样的碱基。当然我们一般用去UCSC的genome browser里面去查询,而且可以得到非常多的信息,多到正常人根本就无法完全理解。但是我如果仅仅是想要一段序列呢?
诚然,我们可以下载3G的那个hg19.fa文件,然后写一个脚本去拿到序列,但是毕竟太麻烦,而且一般这种需求都是临时性的需要,我们当然想要一个非常简便的方法咯。
我这里介绍一个非常简单的方法,是基于perl的cgi编程,当然,不需要你编程了。人家UCSC已经写好了程序,你只需要把网页地址构造好即可,比如chr17:7676091,7676196 ,那么我只需要构造下面一个网页地址
hg38可以更换成hg19,dna?segment= 后面可以按照标准格式更换,既可以返回我们想要的序列了。
网页会返回 一个xml格式的信息,解析一下即可。
This XML file does not appear to have any style information associated with it. The document tree is shown below.
<DASDNA>
<SEQUENCE id="chr17" start="7676091" stop="7676196" version="1.00">
<DNA length="106">
aggggccaggagggggctggtgcaggggccgccggtgtaggagctgctgg tgcaggggccacggggggagcagcctctggcattctgggagcttcatctg gacctg
</DNA>
</SEQUENCE>
</DASDNA>
很明显里面的aggggccaggagggggctggtgcaggggccgccggtgtaggagctgctgg tgcaggggccacggggggagcagcctctggcattctgggagcttcatctg gacctg 就是我们想要的序列啦。
赶快去试一试吧
当然你不仅可以搜索DNA,还可以搜索很多其它的,你也不只是可以搜索人类的
See http://www.biodas.org for more info on DAS.
Try http://genome.ucsc.edu/cgi-bin/das/dsn for a list of databases.
X-DAS-Version: DAS/0.95
X-DAS-Status: 200
Content-Type:text
Access-Control-Allow-Origin: *
Access-Control-Expose-Headers: X-DAS-Version X-DAS-Status X-DAS-Capabilities

UCSC DAS Server.
See http://www.biodas.org for more info on DAS.
Try http://genome.ucsc.edu/cgi-bin/das/dsn for a list of databases.
See our DAS FAQ (http://genome.ucsc.edu/FAQ/FAQdownloads#download23)
for more information.  Alternatively, we also provide query capability
through our MySQL server; please see our FAQ for details
(http://genome.ucsc.edu/FAQ/FAQdownloads#download29).

Note that DAS is an inefficient protocol which does not support
all types of annotation in our database.  We recommend you
access the UCSC database by downloading the tab-separated files in
the downloads section (http://hgdownload.cse.ucsc.edu/downloads.html)
or by using the Table Browser (http://genome.ucsc.edu/cgi-bin/hgTables)
instead of DAS in most circumstances.